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Die Erfindung betrifft ein pharmazeutisches Kombinationspräparat enthaltend 12-Imidazolyl-1-dodecanol und Cisplatin oder ein Platin-Komplex-Analogon; dabei sind hier und im folgenden mit 12-Imidazolyl-1-dodecanol auch seine pharmazeutisch akzeptablen Salze gemeint.
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Bei der Behandlung von Krebserkrankungen mit Zytostatika spielen Cisplatin und Platin-Komplex-Analoga, wie Carboplatin, eine zentrale Rolle, obwohl der Wirkstoff von Cisplatin, cis-Diammindichloroplatin, eine beträchtliche Toxizität aufweist und es bei der Behandlung mit Cisplatin regelmäßig zu toxischen Nebenwirkungen kommt; für die Platin-Komplex-Analoga gilt das Gleiche. Besonders bedeutsam sind dabei die Nephrotoxizität, die Neurotoxizität, die Ototoxizität und die Hepatotoxizität.
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Die Behandlung dieser Nebenwirkungen ist ein möglicher Weg; die Vermeidung dieser Nebenwirkungen ein anderer – und hier setzt die vorliegende Erfindung an, die sich zur Aufgabe gemacht hat, diese Nebenwirkungen gar nicht erst entstehen zu lassen, sie also zu vermeiden bzw. von vorhinein signifikant zu reduzieren, ganz besonders bei der Cisplatin induzierten Nephropathie.
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Gelöst wird dies erfindungsgemäß mit einem pharmazeutischen Kombinationspräparat enthaltend 12-Imidazolyl-1-dodecanol und Cisplatin oder ein Platin-Komplex-Analogon in einem bezogen auf 12-Imidazolyl-1-dodecanol erstaunlich niedrigen Gewichtsverhältnis; es hat sich nämlich überraschend gezeigt, dass schon geringe Anteile an 12-Imidazolyl-1-dodecanol genügen, um den gewünschten Zweck zu erreichen.
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Dieses erfindungsgemäße Gewichtsverhältnis beträgt 1 Gew.Teil 12-Imidazolyl-1-dodecanol auf 5 bis 400 Gew.Teile Cisplatin oder ein Platin-Komplex-Analogon, bevorzugt 1 Gew.Teil 12-Imidazolyl-1-dodecanol auf 10 bis 300 Gew.Teile Cisplatin oder ein Platin-Komplex-Analogon.
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Besonders bevorzugt sind Kombinationen mit Cisplatin in einem Gewichtsverhältnis von 1 Gew.Teil 12-Imidazolyl-1-dodecanol auf 5 bis 80 Gew.Teile Cisplatin, ganz besonders in einem Gewichtsverhältnis von 1 Gew.Teil 12-Imidazolyl-1-dodecanol auf 10 bis 30 Gew.Teile Cisplatin.
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Für den Hochdosisbereich ist insb. eine Kombination mit Carboplatin geeignet in einem Gewichtsverhältnis von 1 Gew.Teil 12-Imidazolyl-1-dodecanol auf 200 bis 300 Gew.Teile Carboplatin, ganz besonders in einem Gewichtsverhältnis von 1 Gew.Teil 12-Imidazolyl-1-dodecanol auf 250 bis 300 Gew.Teile Carboplatin. Gleiches gilt für Cisplatin.
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Für die Behandlung von toxischen Nebenwirkungen von Cisplatin u. a. empfiehlt
WO 2007/124734 A2 12-Imidazolyl-1-dodecanol. Es hat sich demgegenüber aber gezeigt, dass erstaunlich niedrige Dosen an 12-Imidazolyl-1-dodecanol diese toxischen Nebenwirkungen bereits in ihrer Entstehung vermeiden können, wenn sie zusammen mit dem Cisplatin oder Platin-Komplex-Analogon verabreicht werden. Besonders gilt dies bezüglich Nephrotoxizität, Neurotoxizität, Ototoxizität und Hepatotoxizität, ganz besonders bei der Cisplatin induzierten Nephropathie.
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Die vorliegende Erfindung ermöglicht damit einen beachtlichen Fortschritt gegenüber den derzeitigen Möglichkeiten beim Einsatz von Cisplatin und Platin-Komplex-Analoga, indem nicht abgewartet wird, bis sich Nebenwirkungen einstellen und diese dann behandelt werden, sondern indem diesen Nebenwirkungen prophylaktisch entgegen getreten wird; und dies mit überraschend niedrigen Dosen an der Co-Komponente 12-Imidazolyl-1-dodecanol im Verhältnis zu Cisplatin bzw. Platin-Komplex-Analogon.
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So ist bei einer Einmaldosierung von 180 mg Cisplatin ein Zusatz von 10 mg 12-Imidazolyl-1-dodecanol in Form eines Kombinationspräparats geeignet, die Nephrotoxizität, Neurotoxizität, Ototoxizität und Hepatotoxizität des Cisplatin signifikant zu vermindern, sodass eine solche Einmaldosierung in Abständen von 3–4 Wochen ohne die bisherigen Komplikationen wiederholt erfolgen kann.
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Das erfindungsgemäße Kombinationspräparat kann in an sich bekannter Weise weitere pharmazeutische Hilfs- und/oder Zusatzstoffe enthalten, wie Konservierungsmittel, Lösungsvermittler und Kochsalz, insb. in Form einer physiologischen Kochsalzlösung.
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Auch als Konzentrat kann ein erfindungsgemäßes Präparat vorliegen, das dann zur Anwendung wie an sich bekannt verdünnt werden kann.
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Als Lösungsvermittler hat sich Cyclodextrin als überaus geeignet herausgestellt, insb. Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin, bevorzugt in einem molaren Verhältnis von 1 Gew.Teil Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin zu 1,7 Gew.Teilen 12-Imidazolyl-1-dodecanol in Wasser (40 mM in sterilem Wasser mit 150 mM NaCl). Mit dieser Stocklösung wurden auch die weiter unten beschriebenen Untersuchungen durchgeführt.
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Die vorteilhaften Eigenschaften des erfindungsgemäßen Kombinationspräparats belegen die folgenden Untersuchungen.
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Die zytostatische bzw. antiproliferative Wirkung von Cisplatin auf die Zelllinie LLC-PK1 sollte ohne und mit der Inkubation von 12-Imidazolyl-1-dodecanol (gelöst in Cyclodextrin) untersucht werden. Hierfür wurde der CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (G7570) der Firma Promega® verwendet. Dabei korreliert die Bestimmung des ATP-Gehaltes mit der Anzahl an gesunden Zellen.
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Cisplatin wurde in den Konzentrationen 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM und 1,5 mM, die CDKontrollgruppe als 1 μM Lösung und die 12-Imidazolyl-1-dodecanol-Kontrollgruppe als 0,1 μM Lösung inkubiert.
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1 mM Cisplatin wurde zusammen mit 0,1 und 1 μM 12-Imidazolyl-1-dodecanol inkubiert. Die Inkubationsdauer der von Cisplatin betrug 1, 2,5, 6, 12 und 24 Stunden und die von Cyclodextrin und 12-Imidazolyl-1-dodecanol jeweils eine Stunde weniger.
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Innerhalb der ersten sechs Stunden nach der Inkubation mit Cisplatin sind keine Effekte in den verschiedenen Versuchsgruppen erkennbar. Nach 12 Stunden Inkubationsdauer führt Cisplatin in den Konzentration 0,1 μM, 0,5 μM, 1,0 μM und 1,5 μM zu einer durchschnittlichen Abnahme der Viabilität von ca. 150%, wobei keine signifikante Konzentrationsabhängigkeit feststellbar ist. Durch die Inkubation von 1 μM Cyclodextrin kommt es zu einer Verringerung der Viabilität um 50%. 12-Imidazolyl-1-dodecanol verursacht in einer Konzentration von 0,1 μM keinerlei zytotoxischen Effekte trotz der inversen Eigenwirkung von Cyclodextrin. Bei der nachfolgenden Inkubation einer 1 mM Cisplatin-Lösung kann die Viabilität durch 12-Imidazolyl-1-dodecanol um 100 Prozentpunkte gesteigert werden.
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Den gleichen Effekt besitzt auch 12-Imidazolyl-1-dodecanol in der Konzentration von 1 μM, wobei die negative Wirkung von Cyclodextrin berücksichtigt werden muss. Ein vergleichbares Bild zeigt sich nach einer Inkubationsdauer von 24 Stunden:
Auffallend ist hier jedoch, dass 12-Imidazolyl-1-dodecanol in der niedrigeren Dosierung von 0,1 μM eine Steigerung der Viabililtät auf 100% gegenüber der Kontrollgruppe bedingt. Auch führt die Inkubation von 12-Imidazolyl-1-dodecanol in der höheren Dosierung zu einer Abschwächung der anti-viablen Eigenschaften von Cisplatin um fast 200 Prozentpunkte.
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Insgesamt verhindert 12-Imidazolyl-1-dodecanol, dass Cisplatin die epithelialen Zellen des proximalen Nierentubulus in ihrer Regenerationsfähigkeit nachhaltig beeinflusst.
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Der zytotoxische Effekt von Cisplatin auf die Zelllinie LLC-PK1 sollte ohne und mit der Inkubation von 12-Imidazolyl-1-dodecanol (gelöst in Cyclodextrin) untersucht werden. Hierfür wurde der CytoTox-GloTM Cytotoxicity Assay (G9290) der Firma Promega® verwendet.
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Cisplatin wurde in den Konzentrationen 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM und 1,5 mM, die CDKontrollgruppe als 1 μM Lösung und die 12-Imidazolyl-1-dodecanol-Kontrollgruppe als 0,1 μM Lösung inkubiert. 1 mM Cisplatin wurde zusammen mit 0,1 und 1 μM 12-Imidazolyl-1-dodecanol inkubiert, jeweils für 2, 4, 12, 24, 48 und 72 Stunden. Die Inkubationsdauer von Cisplatin betrug 1, 6, 12 und 24 Stunden und die von Cyclodextrin und 12-Imidazolyl-1-dodecanol jeweils eine Stunde weniger.
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Die Anzahl der zytotoxisch affektierten Zellen wurde auf die im jeweiligen Reaktionsansatz bezogene Gesamtzellzahl normiert und als Prozentwert angegeben. Schließlich wurden die Werte aller Inkubationsgruppen auf den Wert der Kontrollgruppe bezogen.
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Es zeigt sich, dass innerhalb der ersten sechs Stunden nach der Applikation von Cisplatin keine Effekte in den verschiedenen Gruppen auftreten. Nach 12 Stunden Inkubation einer 1,5 mM Cisplatin-Lösung steigt die Zytotoxizität in der Zellkultur um 400% und nach weiteren 12 Stunden auf fast 900%. Nach 24 Stunden zeigen alle Versuchsgruppen unterschiedlich starke Effekte:
Die Inkubation von Cisplatin führt in einer konzentrationsabhängigen Weise zu einem Anstieg der Zytotoxizität um 350% (0,1 mM), 610% (0,5 mM), 630% (1,0 mM) und 900% (1,5 μM). Die Inkubation von 1 μM Cyclodextrin besitzt mit einem Anstieg von 630% einen starken zytotoxischen Effekt. 12-Imidazolyl-1-dodecanol verursacht in einer Konzentration von 0,1 μM keinerlei zytotoxische Effekte trotz der inversen Eigenwirkung von Cyclodextrin. Dennoch führt die nachfolgende Inkubation einer 1 mM Cisplatin-Lösung zu keiner signifikanten Verringerung der Zytotoxizität.
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Inkubiert man hingegen 12-Imidazolyl-1-dodecanol in einer Konzentration von 1 μM, wird der zytotxische Effekt um fast 200 Prozentpunkte auf 440% gesenkt. Diese Beobachtung ist unter Verweis auf die negative Wirkung von Cyclodextrin umso bemerkenswerter.
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Man kann festhalten, dass 12-Imidazolyl-1-dodecanol den zytotoxischen Effekt von Cisplatin auf die epithelialen Zellen des proximalen Nierentubulus signifikant reduziert.
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Um die Wirkung von Cisplatin auf die mitochondriale Integrität der LLC-PK1-Zelllinie ohne und mit der Inkubation von 12-Imidazolyl-1-dodecanol (gelöst in Cyclodextrin) untersuchen zu können, wurde der MitoProbeTM JC-1 Assay Kit for Flow Cytomety (M34152) der Firma Invitrogen® verwendet. Der Fluoreszenzfarbstoff JC-1 lagert sich in Abhängigkeit des mitochondrialen Potenzials in die Membranen der Mitochondrien ein. Mithilfe der Durchflusszytometrie kann der Anteil an Zellen bestimmt werden, dessen Mitochondrien im Zuge eines apoptotischen Ereignisses depolarisieren.
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Als Positivkontrolle wurde CCCP (Carbonylcyanide-3-Chlorophenylhydrazone) entsprechend den Herstellerangaben verwendet. Cisplatin wurde in einer Konzentration von 1 mM über einen Zeitraum von 2,5 Stunden ohne und mit weiteren Experimentalsubstanzen inkubiert, deren Inkubationszeit 3,5 Stunden betrug:
| AFS
(Ammoniumeisen-(II)-sulfat-hexahydrat) | freies Eisen | 1,0 | μM |
| CD-Kontrolle | Trägersubstanz Cyclodextrin | 0,1
1,0 | μM
μM |
| Mannit | Scavengervon
Hydroxalradikalen | 1,0 | mM |
| 2,2'-Bipyridine | Eisenchelator | 1,0 | mM |
| 12-Imidazolyl-1-dodecanol | CYP2E1-Inhibitor | 0,1
1,0 | μM
μM |
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Als Positivkontrolle wurde CCCP verwendet, welches in 98% der Zellen zu einer Depolarisation des Potenzials führt (Daten nicht gezeigt). Dies entspricht einer Steigerung von über 500% im Vergleich zu der Kontrollgruppe. AFS (1 mM) erhöht den Anteil um über 250%, was die Bedeutung von freiem Eisen bei der Destabilisierung des mitochondrialen Membranpotenzials unterstreicht. Eine 1 mM Cisplatin-Lösung verursacht eine Steigerung um ca. 150%. Cyclodextrin führt in einer konzentrationsabhängigen Weise ebenfalls zu einem Anstieg von 100% bei einer Endkonzentration von 1 μM. Dieser Effekt wird durch die „reine” Wirkung von 12-Imidazolyl-1-dodecanol nicht beeinflusst.
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Der Hydroxylradikal-Scavenger Mannit (1 mM) senkt die Wirkung von Cisplatin um fast 120 Prozentpunkte, wohingegen der Eisenchelator 2,2'-Bipyridine keinen Effekt ausübt.
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Die Vorinkubation von 12-Imidazolyl-1-dodecanol senkt den Effekt von Cisplatin um 100 Prozentpunkte bei einer Konzentration von 1 μM und um 150 Prozentpunkte bei einer Konzentration von 0,1 μM. Dadurch hebt 12-Imidazolyl-1-dodecanol die membrandestabilisiernde Wirkung von Cisplatin in einem Konzentrationsverhältnis von 1:10.000 komplett auf. Eine mögliche Erklärung für den geringen Effekt von 12-Imidazolyl-1-dodecanol bei einer 10-fach höheren Konzentration wäre der Verweis auf die starke inverse Wirkung von Cyclodextrin.
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Es ist evident, dass 12-Imidazolyl-1-dodecanol die zerstörerische Wirkung von Cisplatin auf das mitochondriale Membranpotenzial komplett verhindern kann. Dadurch werden mit hoher Wahrscheinlichkeit die nachfolgenden pathologischen Prozesse (intrinsischer Weg der Apoptose) ursächlich verhindert.
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12-Imidazolyl-1-dodecanol zeigt in allen durchgeführten Untersuchungen eine ausgeprägte nephroprotektive Wirkung gegenüber der durch Cisplatin verursachten Schädigung des proximalen Tubulusepithels. Hierbei ist insbesondere die Wiederherstellung des Redoxmilieus hervorzuheben, dessen Ungleichgewicht als entscheidender Faktor die Pathophysiologie bestimmt.
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Im Folgenden soll die Erfindung beispielhaft erläutert werden, ohne sie damit unnötig einschränken zu wollen.
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Beispiel 1: Infusionslösung
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Einer im Handel als „Cisplatin 0,5 mg/ml Lösung medac” erhältlichen Lösung von Natriumchlorid, Salzsäure und Wasser, enthaltend pro 50 ml Lösung 25 mg cis-Diammindichloroplatin werden pro 50 ml Lösung 1,25 mg 12-Imidazolyl-1-dodecanol (mittels der oben beschriebenen Stocklösung) zugesetzt. Die Lösung wird, wie dem Fachmann geläufig, als Infusionslösung aufbereitet und zur Verwendung abgefüllt. Das Gewichtsverhältnis von 12-Imidazolyl-1-dodecanol zu cis-Diammindichloroplatin (Cisplatin) in der Infusionslösung beträgt 1 zu 20.
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Beispiel 2: Infusionslösung
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Einer im Handel als „Cisplatin 0,5 mg/ml Lösung medac” erhältlichen Lösung von Natriumchlorid, Salzsäure und Wasser, enthaltend pro 100 ml Lösung 50 mg cis-Diammindichloroplatin, werden pro 100 ml Lösung 0,4 mg 12-Imidazolyl-1-dodecanol (mittels der oben beschriebenen Stocklösung) zugesetzt. Die Lösung wird, wie dem Fachmann geläufig, als Infusionslösung aufbereitet und zur Verwendung abgefüllt. Das Gewichtsverhältnis von 12-Imidazolyl-1-dodecanol zu cis-Diammindichloroplatin (Cisplatin) in der Infusionslösung beträgt 1 zu 125.
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ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur
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